1、LB培养基
Tryptone 10g/L
Yeast extract 5g/L
NaCl 10g/L
加入蒸馏水定容至100mL, 1 mol/L NaOH调节pH值至7.0，121℃高压灭菌20min。
于灭菌的LB液体培养基中，按终浓度50μg/mL加入Km贮存液
2、发酵培养基
Tryptone 30 g（10g/L终浓度）
Yeast extract 45 g（15g/L终浓度）
NaCl 15 g（5g/L终浓度）
甘油 4mL
蒸馏水定容至2600mL,121℃高压灭菌20min
葡萄糖 60 g（20g/L终浓度）
蒸馏水定容至100 mL，115℃高压灭菌20min，接种时加至发酵罐中
Na2HPO4?12H2O 15 g（5g/L终浓度）
蒸馏水定容至100 mL，115℃高压灭菌20min，接种时加至发酵罐中
补料葡萄糖 45 g
蒸馏水定容至100 mL，115℃高压灭菌20min，补料时加至发酵罐中
3、100mmol/L IPTG贮存液
IPTG　0.238g溶于10mL双蒸水中，过滤除菌，分装，－20℃冻存备用。
4、10％ 磷酸
取10g 磷酸用蒸馏水定容到100ml，121℃ 高压灭菌20min。
5、40%氢氧化钠溶液：121℃高压灭菌20min。
6、泡敌：121℃高压灭菌20min 备用

二、 种子培养液的准备
取冻存的甘油菌，按2.5%~3%的接种量接入装有100ml LB培养基的瓶中，37℃，200rpm/min过夜培养后接入发酵罐，接种浓度为200ml/3L。

三、发酵罐的灭菌
1． 将已配制好的发酵用培养基倒入发酵罐中。
2．打开发酵罐系统的动力开关，选择“fermentation”，用“screen”调至“calibration”用“enter”确认。
3．校正pH电极的零点和满刻度。
1)用“ ”调至“zero”。
2)把pH电极浸入pH值为6.86的标准缓冲液中, 调至read档后输入6.86。
3)用“ ”键调到“span”档。
4) pH电极用蒸馏水清洗后浸入pH为9.18的标准缓冲液中, 调至read档后输入9.18。
5)重复校正2-3次，直至read的值与所设值相差在0.02以内。
4．校正溶氧电极零点。
1)把“ ”键调到DO档, 再用“ ”调到0档。
2)在200-300ml亚硫酸钠(Na2SO3)饱和水溶液中(放入500ml烧杯中), 加入约5g硼酸钠(Ba2B4O7), 或约5g 硫酸铜(CuSO4), 搅拌此无氧溶液, 并调节至37℃。
3)把溶氧电极浸入此无氧溶液, 调至zero栏后，输入“0”。
4)或直接把溶氧电极电缆断开，等读数稳定后，调至zero栏后，输入“0”。
5)接上溶氧电极电缆，看DO读数是否能够上升并稳定在某一读数，表明溶氧电极能够正常工作。
5．各电极插入顶部盖板的相应孔内, 旋紧螺帽, 插入pH电极时要极细心, 必要时加一些蒸馏水润滑，防止电极损坏。
6．用橡皮筋扎住各个控制试剂瓶(control reagent)的各个空气进出口。
7． 拆除各个电极上的连接电缆线, 套上各自的保护套子。拔去过滤器入口处的通气管,封口膜密封。拔去出气口冷凝器的进水和出水管道。
8．拆除冷却水管, 移去搅拌马达。将发酵罐搬离底座。
9．发酵罐(内装培养基), 试剂三角瓶置于高压灭菌锅中灭菌, 121℃高压灭菌30min
10．灭菌结束, 冷却后, 发酵罐重新安置在底座上备用。